меню

Результаты клинического испытания Фелиферона при ВИК и ВЛК у кошек

Е.Б. Бажибина1,2, кандидат ветеринарных наук, научный консультант лаборатории ИВЦ МВА, ветеринарный врач-инфекционист СВК «Свой Доктор» (alena_centr@bk.ru), С.А. Пархоменко3, ветеринарный врач НТЦ «БиоИнвест» (parhonenko@bio-invest.ru).

1 Инновационный ветеринарный центр Московской ветеринарной академии им. К.И. Скрябина (ИВЦ МВА) (109472, г. Москва, ул. Ак. Скрябина, д. 23).

2 Сеть ветеринарных клиник (СВК) «Свой Доктор» (109387 Москва, ул. Краснодонская, д. 16А).

3 Научно-технологический центр (НТЦ) «БиоИнвест», (117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20).

В статье впервые показано влияние Фелиферона на количественные показатели РНК вируса лейкемии кошек и вируса иммунодефицита кошек в периферической крови. У кошек, которым применяли Фелиферон, зарегистрировано снижение вирусной нагрузки на 1,3 log10 в сравнении с контрольной группой (р=0,008), улучшение гематологических параметров и общего состояния. Гематологические изменения в группах с FIV носили менее выраженный (чем при вирусной лейкемии) характер. Улучшение клинического состояния кошек после применения Фелиферона проявлялось увеличением активности и аппетита, снижением выраженности конъюнктивитов, нормализацией функции ЖКТ при обоих заболеваниях.

Ключевые слова: хронические вирусные инфекции кошек, лейкемия кошек, иммунодефицит кошек, вирусная нагрузка, Фелиферон, полимеразно-цепная реакция.

Сокращения: БАК– биохимический анализ крови, в/м – внутримышечно, ВН – вирусная нагрузка, ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота, ЖКТ – желудочно-кишечный тракт, ИФН – интерфероны, МЕ – международные единицы, НПВС – нестероидные противовоспалительные средства, ОАК – общий анализ крови, ПЦР – полимеразно-цепная реакция, РНК – рибонуклеиновая кислота, РЭС – ретикуло-эндотелиальная система, СОЭ – скорость оседания эритроцитов, FeLV – feline leukemia virus (вирус лейкемии кошек), FIV – feline immunodeficiency virus (вирус иммунодефицита кошек), FPV – вирус панлейкопении кошек.

Введение

Ретровирусные инфекции кошек, вирусная лейкемия кошек (возбудитель FeLV) и вирусный иммунодефицит кошек (возбудитель FIV) – это длительные, вялотекущие заболевания, характеризующиеся поражением кроветворных органов, нарушением процесса созревания клеток крови, снижением иммунитета, повышением риска появления злокачественных новообразований и активизации любой инфекции. Значительное число бродячих животных (неограниченный контакт), скученное содержание (питомники и приюты) создают условия для увеличения распространенности этих вирусных инфекций в поголовье домашних кошек. Так, в 2011 г. распространенность заболевания, обусловленного FeLV, составила 11,9 %, FIV — 7,69 % [1], в 2013–2014 гг.: FeLV — 17,8 %, FIV — 2,1 %; в 2015 г.: FeLV — 20,7 %, FIV — 4,5 % [2].

Увеличение числа кошек, инфицированных FeLV, настоятельно диктует отечественным ветеринарным врачам апробировать и вводить в клиническую практику препараты, препятствующие репликации вируса в клетках организма.

Об эффективности применения кошачьего ИФН при лечении ретровирозов кошек имеются публикации в отечественной и зарубежной литературе [3…5, 7]. Особый интерес представляет отечественный препарат Фелиферон, действующее вещество которого – ИФН кошки.

Цель исследования

Провести клиническое испытание ветеринарного препарата отечественного производства Фелиферон на кошках с FeLV- и FIV-инфекциями, с учетом клинических, гематологических показателей, качественных и количественных вирусных характеристик.

Материалы и методы

Были обработаны клинические данные и результаты лабораторных исследований спонтанно выбранных кошек, наблюдающихся в ветеринарных клиниках СВК «Свой Доктор» и ИВЦ МВА. По имеющимся в базе данным были сформированы 4 группы (по FeLV – контрольная n=13, опытная n=10, по FIV – контрольная n=5, опытная n=7 кошек). Все группы составлены из кошек, у которых перед введением в опыт посредством ПЦР была выявлена провирусная ДНК к соответствующему вирусу.

Перед введением в опыт кошек подвергали исследованиям: ОАК, БАК; ПЦР на ДНК FeLV или FIV, Mycoplasma haemofelis, парвовирус кошек. Также определяли ВН, то есть количество копий РНК возбудителя в 1 мл плазмы как объективный показатель течения ретровирусной инфекции в организме кошки [6].

В эксперимент включали животных, отрицательных по M. Hаemofelis и FPV, и согласно рекомендациям производителя, с гемоглобином не менее 80 г/л. С учетом клинических симптомов всем кошкам назначали симптоматическую терапию, включающую в себя (по состоянию животного): антибактериальные средства, витаминные препараты, гепатопротекторы, нефропротекторы, антиоксиданты по необходимости.

Таблица 1. Перечень клинически значимых изменений показателей ОАК кошек опытной группы с FeLV

Показатель Средние значения до эксперимента (n=11) Средние значения после эксперимента (n=10) Изменения, %
Лейкоциты, 109 11,09 8,22 – 25,88
Эритроциты, 1012 5,99 6,06 + 1,16
Гемоглобин, г/л 95,18 104,27 + 8,72
Гематокрит, % 29,37 30,06 + 2,30
Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах, г/л 309,00 327,70 + 5,71
Тромбоциты, 109 290,90 295,36 + 1,51
Макротромбоциты, % 22,86 19,87 – 13,07
СОЭ, мм/ч 31,95 24,55 – 23,16
Лимфоциты, 109 1,62 2,13 + 31,48
Моноциты, 109 0,29 0,38 + 31,03

Кошки опытной и контрольной групп не получали в процессе исследования НПВС, стероиды, антиретровирусные и иммуномодулирующие препараты.

В комплексной терапии кошки опытной группы получали Фелиферон в дозе 0,5 или 1,0 в/м (что соответствует 200000 или 400000 МЕ), 1 раз в день, в течение 7 дней и затем еще 3 инъекции с интервалом 48 ч. Все указанные выше исследования выполнены перед применением Фелиферона и после окончания его курса. На всем протяжении эксперимента вели наблюдение за состоянием кошек.

Все данные, включая массу и возраст животных, обрабатывали с применением непараметрических методов статистики. На момент начала исследования кошки с вирусной лейкемией имели различные клинические проявления: слабые анемии, энтероколиты, гингивиты разной степени выраженности, вялотекущие риниты, конъюнктивиты. В группе кошек с FIV преобладали клинические проявления хронических бактериальных инфекций кожи и слизистых: стоматиты, гингивиты, дерматиты. Все группы животных перед началом исследования были статистически однородны.

Результаты и обсуждение

Вирусная лейкемия кошек. Оценка эритроцитарного звена крови кошек опытной группы показала повышение гематокрита, содержания гемоглобина, эритроцитов на 2,30 8,72 и 1,16 %, соответственно. Также мы наблюдали уменьшение СОЭ на 23,16 %, что характеризует увеличение время жизни эритроцитов в кровеносном русле с улучшением оксигенации тканей организма (табл. 1).

Повышение значения показателей эритроцитарного звена привело к нормализации средней концентрации гемоглобина в эритроцитах (+5,71 %), поскольку у животных до эксперимента он был ниже референсных значений (норма 320…280).

Оценка лейкоцитарного звена показала снижение общего количества лейкоцитов на 25,88 %, повышение содержания лимфоцитов на 31,48 % и моноцитов – на 31,03 %. Увеличение количества лимфоцитов и моноцитов характерно для повышения значений показателей обоих звеньев иммунитета – клеточного и гуморального, улучшения фагоцитарной активности. Кроме того, у кошек с выявленной лейкопенией до эксперимента (n=3), мы наблюдали повышение общего количества лейкоцитов после применения Фелиферона. Среднее количество лейкоцитов данной подгруппы повысилось на 30,78 % (с 4,34х109/л до 6,27х109/л) и пришло к референсным значениям для данного вида животных.

При сравнении показателей крови опытной и контрольной групп (табл. 2), выявлено, что несмотря на применение антибактериальных препаратов в обеих группах, тенденция к нормализации общего количества лейкоцитов в группе с применением Фелиферона наиболее значима: –25,88 % и –4,73 %, соответственно. Уровень достоверности изменения количества лейкоцитов составляет 0,026 (p=0,026) при доверительном интервале 95 %.

Также значимые различия были выявлены при сравнении содержания лимфоцитов и моноцитов в гемограмме. Количество лимфоцитов в контрольной группе снизилось на 2,72 %, что можно опосредованно характеризовать как показатель снижения иммунного ответа и прогрессирования инфекции. Количество моноцитов, напротив, значимо увеличилось – в 3,17 раза и превысило референсные значения, что характерно для прогрессирования вторичной (вероятно бактериальной) инфекции на фоне иммуносупрессивного состояния, вызванного носительством FeLV.

Выраженное повышение значений эритроцитарных показателей животных контрольной группы, по сравнению с опытной, вероятно, должно учитываться врачами и быть отражено в инструкции к препарату в качестве рекомендации о дополнительном применении в комплексной терапии с Фелифероном средств, корректирующих эритроцитарное звено крови, – индивидуально для каждого животного в зависимости от типа анемии (гемолитическая, железодефицитная, анемия хронических заболеваний и т. д.).

Несмотря на то, что у всех кошек, участвующих в эксперименте, проводили БАК по 12 показателям (общий белок, альбумин, глобулин, глюкоза, мочевина, креатинин, амилаза, щелочная фосфатаза, гаммаглютаминтрансфераза, аланинаминотрансфераза, аспартатаминотранфераза, холестерин), сравнительный анализ подавляющего большинства показателей у контрольной и опытной групп не выявил значимых различий. Это можно объяснить низкой токсичностью препарата.

В среднем по группе ВН уменьшилась на 1,3 log10 – это хороший показатель (табл. 3, 4). Так как по некоторым данным [8, 9], критерием оценки антиретровирусной эффективности препаратов следует считать снижение вирусной нагрузки от 1 до 2 log10, то есть в 1000…10000 раз.

В среднем по контрольной группе ВН не имела тенденции к уменьшению и в некоторых случаях даже увеличилась на 0,1…2,8 log10.

Уровень достоверности различий между значениями ВН FeLV в опытной и контрольной группах составляет 0,008 (p=0,008) при 95%-м доверительном интервале.

Таблица 2. Динамика показателей клинического анализа крови кошек опытной и контрольной групп с FeLV

Показатель Изменения, %
опытной группы (n=11)* контрольной группы (n=10)*
Лейкоциты, 109 – 25,88 – 4,73
Эритроциты, 1012 + 1,16 + 18,19
Гемоглобин, г/л + 8,72 + 21,34
Гематокрит, % + 2,30 + 12,47
Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах, г/л + 5,71 – 0,83
Тромбоциты, 109 + 1,51 + 23,81
СОЭ, мм/ч – 23,16 – 23,81
Лимфоциты, 109 + 31,48 – 2,72
Моноциты, 109 + 31,03 + в 3,17 раз

Таблица 3. Данные исследования ВН кошек опытной группы с FeLV

№ животного ВН, копий/мл Порядок изменения, log10
до эксперимента после эксперимента
1 800 Менее 500 0,2
2 21 000 000 350 000 1,8
3 87 000 Менее 500 2,2
4 4 800 000 590 000 0,9
5 13 000 000 3 400 000 0,6
6 36 000 000 570 000 1,8
7 43 000 000 6 200 000 0,8
8 340 000 Менее 500 2,8
9 5 400 000 71 000 1,9
10 15 000 000 7 500 000 0,3
11 32 000 000 29 000 000 0,1
12 760 000 000 7 500 000 2,0
13 98000 Менее 500 2,3
Среднее значение 1,3

Таблица 4. Данные исследования ВН кошек контрольной группы с FeLV

№ животного ВН, копий/мл Порядок изменения, log10
до эксперимента после эксперимента
1 12 000 7500000 – 2,8
2 76000000 68000000 0,0
3 23000000 24000000 0,0
4 3400000 5 100 2,8
5 67000000 43000000 0,2
6 6 700 000 41000000 – 0,8
7 54000000 62000000 – 0,1
8 4 800 660 0,9
9 580 000 1100000 – 1,3
10 6900000 4400000 0,2

Примечание: отрицательные значения указывают на повышение вирусной нагрузки.

Таблица 5. Динамика показателей клинического анализа крови кошек опытной и контрольной групп с FIV

Показатель Изменения, %
опытной группы (n=7)* контрольной группы (n=5)*
Лейкоциты, 109 – 38,33 – 9,50
Эритроциты, 1012 – 24,10 – 26,12
Гемоглобин, г/л – 1,65 – 3,70
Гематокрит, % – 14,12 – 13,92
Тромбоциты, 109 – 26,55 + 31,66
СОЭ, мм/ч – 23,16 – 23,81
Лимфоциты, 109 + 42,73 – 1,51

Вирус иммунодефицита кошек

Гематологические изменения в группах с FIV носили менее выраженный (чем при вирусной лейкемии) характер (табл. 5). Вероятно, это связано с тем, что патогенез вирусного иммунодефицита кошек имеет тенденцию к приобретению выраженного хронического характера и более длительному течению.

Тем не менее, в процессе эксперимента было выявлено значимое снижение общего количества лейкоцитов в 4,03 раза в опытной группе по сравнению с контрольной, повышение содержания лимфоцитов на 42,73 %, в то время как в контрольной группе количество лимфоцитов снизилось на 1,51 %. Надо отметить, что в опытной группе не было кошек с выраженной лейкопенией и среднее значение общего количества лейкоцитов до эксперимента составляло 10,54.

Показатели, характеризующие эритроцитарное звено крови, не имели значимых различий в обеих группах. В то же время обращает на себя внимание изменение общего количества тромбоцитов. Содержание тромбоцитов в опытной группе снизилось на 26,55 %, а в контрольной группе увеличилось на 31,66 % (среднее значение количества тромбоцитов кошек до эксперимента – 496,33х109/л). Тромбоцитоз при вирусном иммунодефиците кошек может характеризовать обострение хронических сопутствующих бактериальных и микозных инфекций и опосредованно функциональную недостаточность органов РЭС.

Поэтому нормализация количества тромбоцитов (до референсных значений) является благоприятным прогностическим признаком при течении FIV.

Надо отметить повышение содержания альбумина в опытной группе с FIV на 31,48 %, снижение содержания общего белка на 8,7 % и глобулинов на 28,7 %. Снижение количества общего белка у животных, получающих в комплексной терапии ИФН, происходило за счет купирования воспалительного процесса и снижения выброса белков острой фазы. Снижение содержания глобулинов, соответственно, характеризует улучшение функциональной активности печени.

Снижение ВН к FIV у кошек составило, в среднем, 1 log10 (табл. 6).

По результатам нашего эксперимента диагностическую значимость ПЦР в исследовании ВН у кошек с FIVинфекцией оценить трудно. Необходимо большее количество наблюдений и, возможно, снижение порога чувствительности тест-системы.

В силу небольшого числа животных контрольной группы и недостаточной чувствительности тест-системы для количественного определения РНК, сравнение опытной и контрольной группы кошек носителей FIV не представляется возможным.

Необходимо отметить, что в опытных группах c FeLV и FIV снижение клинических проявлений сопутствующих инфекций были более выражены по сравнению с группами без применения Фелиферона.

Таблица 6. Данные исследования ВН кошек опытной группы с FIV

№ животного ВН, копий/мл Порядок изменения, log10
до эксперимента после эксперимента
1 Менее 500 копий Менее 500 копий
2 Менее 500 копий Менее 500 копий
3 Менее 500 копий Менее 500 копий
4 31000000 3800000 0,9
5 2500000 1200000 0,3
6 8100000 420 000 1,3
7 23 000 Менее 500 копий 1,7

Выводы

Применение Фелиферона в комплексной симптоматической терапии ограниченным курсом 14 дней у кошек носителей вирусной лейкемии приводит к следующему:

  • снижению ВН на 1,3 log10 в сравнении с контрольной группой со статистическим значимым различием р=0,008 при уровне доверительного интервала 95 %;
  • нормализации общего количества лейкоцитов,
  • изменению гемограммы с повышением содержания лимфоцитов на 24,14 % и моноцитов на 22,29 %.

У кошек – носителей FIV достоверно выявлена нормализация количества тромбоцитов (снижение на 26,55 %, при значениях до эксперимента 496,33х109/л). Применение Фелиферона привело к выраженной коррекции диспротеинемии у кошек – носителей FeLV и FIV – повышению содержания альбумина на 31,48 % и снижению содержания глобулинов на 28,7 %, и, соответственно, увеличению альбумин/глобулинового соотношения.

Улучшение клинического состояния кошек после применения Фелиферона проявлялось увеличением активности и аппетита, снижением выраженности конъюнктивитов, нормализацией функции ЖКТ.

Фелиферон рекомендуется кошкам как противовирусный препарат в комплексной терапии лечения инфекционных заболеваний, вызванных FeLV и FIV, с дополнительным применением препаратов, корректирующих эритроцитарное звено индивидуально для каждого животного в зависимости от типа анемии.

Библиография

1. Бажибина, Е.Б. Лейкемия и иммунодефицит – скрытые вирусные инфекции кошек / Е.Б. Бажибина, Ю.Б. Соколова // Российский ветеринарный журнал. МДЖ. – 2010. – №1. – С. 14–16.

2. Бажибина, Е.Б. Мониторинг результатов лабораторных исследований кошек носителей хронических вирусных инфекций / Е.Б. Бажибина, В.А. Бажибина // Российский ветеринарный журнал.МДЖ. – 2016. – №3. – С. 6–8.

3. Пархоменко, С.А. / С.А. Пархоменко, О.А. Зейналов / Применение Фелиферона в качестве средства этиотропной терапии при вирусной лейкемии кошек // Российский ветеринарный журнал. – 2017. – № 5. – С. 34–36.

4. Cattori, V. Real-time PCR investigation of feline leukemia virus proviral and viral RNA loads in leukocyte subsets / V. Cattori, A.C. Pepin, at al. // Vet. Immunol Immunophatol. – 2008 May 15. ?No. 123 (1-2). – pp. 124–128. doi: 10.1016/j.vetimm.2008.01.018. Epub 2008 Jan 19.

5. Cotter, S.M. Feline viral neoplasia / S.M. Cotter // In Infectious diseases of the dog and cat, 2nd ed.; Greene, C.E. Ed. – Philadelphia: WB Saunders, 1998, pp. 71–84.

6. Nesina, S. Retroviral DNA-the silent winner: blood transfusion containing latent feline leukemia provirus causes infection and disease in naive recipient cats / S. Nesina, K.A Helfer-Hungerbuehler. // Retrovirology. – 2015. – No. 12. – pp. 105. https://doi.org/10.1186/s12977-015-0231-z.

7. Zeinder, N.S. Mathiason-dubar et al. Alpha Interferon (2b) in Combination with Zidovudine for the Treatment of Presymptomatic Feline Leukemia VirusInduced Immunodeficiency Syndrome / N.S. Zeidner, M.H. Myles, K. Candace // Antimicrobial agents and chemotherapy. – 1990. – Sept. – pp. 174–176.

8. Braunstein, S.L. Using HIV Viral Load From Surveillance to Estimate the Timing of Antiretroviral Therapy Initiation / S.L. Braunstein, M. Robertson McKaylee, J. Myers, D. Nash. Режим доступа: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5584788/

9. Guidelines for the Use of Antiretroviral Agents in Adults and Adolescents Living with HIV Plasma HIV-1 RNA (Viral Load) Monitoring. Режим доступа: https://aidsinfo.nih.gov/guidelines/html/1/adult-and-adolescent-arv/458/plasmahiv-1-rna--viral-load--and-cd4-count-monitoring

Оценка эффективности применения Фелиферона при лечении кошек, больных ретровирусными инфекциями

Мы хотим узнать, кому интересен Фелиферон. Кто вы?