Оценка безопасности лекарственного препарата Догферон при внутримышечном введении здоровым собакам

Пархоменко Сергей Александрович – ветеринарный врач ООО «НТЦ «БиоИнвест» (parhomenko@bio-invest.ru);

Зейналов Орхан Ахмедович, к.б.н. – главный специалист ООО «НПК «СКиФФ».

Список аббревиатур и условных сокращений

АЛТ – аланинаминотрасфераза; АСТ – аспартатаминотрансфераза; БАК - биохимический анализ крови; ГГТ - γ-глутамилтрансфераза; ЕД - единицы действия; ЛДГ – лактатдегидрогеназа; ЛП - лекарственный препарат; МЕ - международные единицы; НТЦ – научно-технологический центр; ОАК - общий анализ крови; СОЭ – скорость оседания эритроцитов; СЯ – сегментоядерные (нейтрофилы); ЩФ - щелочная фосфатаза; EO – эозинофилы; Ht – гематокрит; LE- лейкоциты; LY – лимфоциты; MCH - среднее содержание гемоглобина в эритроците; MHCH - средняя концентрация гемоглобина в эритроците; NE - нейтрофилы (сегментоядерные); р - показатель достоверности; RBC – эритроциты.

Реферат

Безопасность лекарственного препарата Догферон на основе интерферона собаки альфа-1 была изучена при использовании на беспородных собаках в терапевтических и повышенных дозах в течение 21 дня. Клинико-инструментальное обследование собак не выявило аномалий за весь период эксперимента. Применение интерферона собаки альфа-1 не вызывает каких-либо клинически значимых изменений параметров общего анализа крови собак. Применение лекарственного препарата Догферон вызывает повышение уровня щелочной фосфатазы, не связанное с изменениями уровня других ферментов печени. Экспериментальный препарат Догферон безопасен при использовании в терапевтической и высоких дозах.

Ключевые слова: интерферон альфа собаки, интерферон альфа, безопасность интерферона собаки, побочные действия интерферона собаки.

Введение

Исследование безопасности лекарственного препарата (ЛП) для ветеринарного применения Догферон на основе рекомбинантного интерферона собаки альфа-1, производства НТЦ «БиоИнвест», г. Москва, при внутримышечном введении здоровым собакам в трех уровнях доз в течение 21 дня.

Интерфероны — общее название, под которым объединяют ряд белков со сходными свойствами, выделяемых клетками организма в ответ на вторжение вируса. Благодаря интерферонам, клетки становятся невосприимчивыми по отношению к вирусу [1].

В настоящее время интерфероны рассматриваются как наиболее изученные медиаторы врожденного иммунитета, обладающие широким спектром биологической активности, и пригодных для профилактики и лечения вирусных инфекций и ряда невирусных заболеваний [2].

Ветеринарные и медицинские врачи выделяют три направления действия интерферонов: противовирусное, антипролиферативное и иммуностимулирующее. Именно на этих направлениях строится тактика применения интерферонов при заболеваниях.

Интерфероны 1 типа обладают выраженным противовирусным действием, блокируя синтез вирусных белков и подавляя некоторые другие этапы их репродукции. Рекомбинантные интерфероны занимают доминирующее положение по степени изученности и масштабам применения [3].

Экспериментальный препарат представляет собой раствор для инъекций. В 1 мл в качестве действующего вещества содержится 5 мкг/мл или 1 000 000 МЕ/мл (2,5 млн МЕ/флакон) интерферона собаки альфа-1. Вспомогательные компоненты: фосфатный буферный раствор; бензиловый спирт – 0,9 %. Препарат имеет рН – 7,1-7,6.

Цель исследования

Цель исследования – провести оценку безопасности нового ветеринарного лекарственного препарата Догферон, производства НТЦ «БиоИнвест», г. Москва, у здоровых собак при внутримышечном введении в однократной, двукратной и десятикратной дозе в течение 21 дня.

Материалы и методы

Контролируемое исследование ЛП Догферон у здоровых собак при внутримышечном введении. Протоколом клинического исследования было предусмотрено включение 40 здоровых собак разного пола в возрасте 1 - 7 лет, средней массой тела 13±4,0 кг, которым своевременно проведены все необходимые профилактические обработки. Не допускались в опыт собаки с аллергическими заболеваниями, травмами, агрессивные животные.

Животные содержались на территории приюта для бездомных животных города Москвы, содержание вольерное, групповое. Все животные имели неограниченный доступ к воде, кормление производилось сухим кормом.

Популяция экспериментальных животных разделена на контрольную и 3 опытные группы по 10 голов в каждой методом случайного выбора при помощи программного пакета STATISTICA 10.

Проводили обследование, включавшее сбор анамнеза, клинический осмотр, термометрию, аускультацию сердца и легких, подсчет пульса и частоты дыханий в минуту, взвешивание, общий (с СОЭ и лейкограммой) и биохимический анализ крови. Перед взятием крови в контрольные сутки животные подвергались 12-часовой голодной диете.

Взвешивание проводилось на ветеринарных весах Lema A 12 E. Взятие венозной крови собак проводили в первой половине дня, после 12 часовой голодной диеты из v. cephalica с соблюдением правил асептики, посредством вакуумной системы для взятия крови производства Improvacuter, Германия.

После взятия пробирки с венозной кровью помещалась в термоконтейнер с хладагентом, и доставлялись в лабораторию с соблюдением температурного режима +2…+8оС. Лабораторные исследования общего и биохимического анализа крови проводились в ветеринарной лаборатории «Неовет» по адресу Москва, Быковское шоссе 44а. Анализ лабораторных проб производился не позднее 24 часов с момента взятия крови у собаки. ОАК проводился с определением СОЭ и микроскопией мазка по стандартным методикам. Перечень показателей БАК: билирубин, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, общий белок, альбумины, глобулины, ЩФ, альфа-амилаза, глюкоза, ЛДГ.

После распределения животных по группам назначен ЛП Догферон в режимах дозирования согласно таблице 1. Дозировка препарата определена на основании результатов исследования по подбору доз [4].

Оценка безопасности проводилась посредством клинического наблюдения и лабораторного исследования периферической крови.

Статистическая значимость различий оценивалась на уровне р≤0,05. Для определения различий между выборками односторонний ранговый дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса. Учитывалась также клиническая значимость статистически достоверных различий по показателям между группами.

Результаты

Результаты первичного обследования

По результатам первичного обследования показатели пульса, частоты дыхательных движений, температуры тела, ОАК, БАК были в пределах физиологических норм у всех экспериментальных животных. Аппетит, жажда, габитус сохранены. На основании результатов проведенного клинико-лабораторного обследования, статистического анализа полученных данных, сделано заключение об однородности популяции экспериментальных животных и пригодности ее к исследованию.

Результаты клинического наблюдения за экспериментальными животными

На протяжении всего эксперимента животные сохраняли нормальный габитус, упитанность, аппетит, жажду, активное поведение, нормальное восприятие факторов окружающей среды. Показатели температуры, пульса, частоты дыхательных движений сохранялись в норме в течение всего эксперимента.

Результаты лабораторных исследований периферической крови у экспериментальных животных

По результатам ОАК, начиная с 7 суток наблюдения, зарегистрировано изменение показателя общего количества лейкоцитов и их разновидностей, и эритроцитарных индексов. Динамика гематологических показателей представлена в таблице 2.

Статистически значимых различий по остальным показателям ОАК в течение 21 дня не зарегистрировано.

По результатам биохимического анализа крови отмечено повышение показателя щелочной фосфатазы вплоть до уровня двух физиологических норм с увеличением дозировки ЛП Догферон. Данные приведены в таблице 3.

Статистически значимых различий по остальным показателям БАК в течение 21 дня не зарегистрировано, все биохимические показатели были в пределах физиологических норм.

Обсуждение

На 7 день наблюдения показатели общего количества лейкоцитов и их разновидностей (СЯ нейтрофилов, эозинофилов, лимфоцитов) снижены относительно контроля, однако находятся в пределах границ физиологической нормы (таблица 2). Согласно данным исследований [5] применение различных схем интерферона может вызывать лейкопению. Для коррекции лейкопении требуется снижение дозы интерферона. С учетом передозировки ЛП Догферон и того, что лейкоциты в группе «Опыт 3» опускались до нижней границы референсных значений, данное явление не является побочным действием.

На 14 сутки эксперимента отмечено устранение дефицита общего количества лимфоцитов и их разновидностей, наблюдаемого в группе «Опыт 3» в 7 день исследования. Зарегистрировано значимое снижение показателя гематокрита (р=0,001), гемоглобина (р=0,004), общего количества эритроцитов (р=0,001) с увеличением дозы интерферона собаки альфа-1. Среднее содержание (р=0,006) и концентрация (р=0,005) гемоглобина в эритроците при этом увеличены. За пределы физиологических норм выходят показатели гематокрита, эритроцитов (снижение), среднего содержания и концентрации гемоглобина в эритроците (повышение) (таблица 2). Данные изменения не носят угрожающего здоровью и жизни характера и являются типичными при длительном применении интерферона в высоких дозах.

На 21 сутки эксперимента отмечены статистически значимые изменения показателя средней концентрации гемоглобина в эритроците (р=0,011) и общего количества лейкоцитов (р=0,030) с увеличением дозы ЛП Догферон. Однако, за пределы физиологических данные показатели не выходят в отличие от предыдущих контрольных суток (таблица 2).

Все остальные показатели ОАК у экспериментальных животных в течение 21 дня исследования были в пределах физиологической нормы и не различались между собой.

По результатам оценки БАК, начиная с 7 суток наблюдения, отмечен повышенный уровень щелочной фосфатазы, который сохранялся также в 14 и 21 день опыта (таблица 3). Повышение уровня щелочной фосфатазы при нормальных значениях АЛТ, АСТ, ЛДГ и альфа-амилазы не является признаком лекарственного поражения печени [6]. Применение некоторых ЛП может вызывать повышение уровня щелочной фосфатазы.

Статистически значимых различий по остальным показателям БАК в течение 21 дня не зарегистрировано, все биохимические показатели были в пределах физиологических норм.

Заключение по безопасности

На протяжении всего эксперимента клинико-инструментальное обследование собак не выявило отклонений. Животные контрольной и опытных групп сохраняли нормальный габитус, упитанность, аппетит, жажду, активное поведение, нормальное восприятие факторов окружающей среды. Показатели температуры, пульса, частоты дыхательных движений сохранялись в норме в течение всего эксперимента.

Применение ЛП Догферон не вызывает клинически значимых изменений показателей общего анализа крови собак.

Применение экспериментального препарата вызывает повышение уровня щелочной фосфатазы у здоровых животных. Повышение уровня щелочной фосфатазы при нормальных значениях АЛТ, АСТ, ЛДГ и альфа-амилазы не является признаком лекарственного поражения печени [6].

Экспериментальный лекарственный препарат Догферон безопасен при применении здоровым собакам в однократной, двукратной и десятикратной дозе на протяжении 21 дня.

Работа выполнена при поддержке Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере.

Список использованной литературы

1. Stewart W.E./In: The interferon system.-Springer-Verlag/Wein-New-York.-1979 / [Электронный ресурс.] – Режим доступа: URL: https://www.springer.com/us/book/9783709134320 (дата обращения 03.08.2019).

2. Ершов Ф.И., Парфенов В.В. Методические указания по изучению специфической активности интерферонов и индукторов интерферона. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М. – 2000. - С. 281-286.

3. Ершов Ф.И., Наровлянский А.Н. Основные итоги изучения системы интерферона к 2011 году. Сборник научных статей «Интерфероны – 2011», М. – 2012. - С. 14-34.

4. Отчет по подбору доз лекарственного препарата «Догферон® раствор для инъекций» при парвовирусной инфекции щенков. НТЦ «БиоИнвест», Москва, 2019.

5. А.М. Рюмин, О.Л. Соболевская, О.В. Корочкина. Побочные эффекты разных схем интерферонотерапии хронического гепатита C и их коррекция. Медицинский совет, № 15, 2017, с. 89-91

6. Мехтиев С. Н., Зиновьева Е. Н., Мехтиева О. А. / Лекарственные поражения печени при многокомпонентной терапии коморбидных состояний // Ж. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - Выпуск 118. - № 6. - 2015. – с. 71-77.

Спасибо за ваш вопрос!
Вы подписаны!